一(yi).脱(tuo)蜡至(zhi)水
二(er)甲苯(ben)Ⅰ(8min)
二甲(jia)苯Ⅱ(8min)
无水(shui)乙醇和(he)二甲苯1:1(5min)
无(wu)水乙醇(chun)(3min)
95%乙醇(3min)
85%乙醇(3min)
75%乙(yi)醇(3min)
PBS洗(xi)3遍
二．抗(kang)原修(xiu)复
EDTA抗原修复(fu)液(ye)修复。
抗原(yuan)修复100℃ 自(zi)然(ran)冷却(que)至室温(wen)。
三(san)．PBST洗2遍(bian)，PBS洗1遍。每(mei)次(ci)5min。
四．用(yong)30%H2O2和甲醇配(pei)制(zhi)3%的H2O2溶(rong)液。每张(zhang)切(qie)片加1滴，室温下(xia)孵(fu)育10分钟(zhong)，以(yi)阻(zu)断(duan)内(nei)源(yuan)性过(guo)氧(yang)化(hua)物(wu)酶(mei)的活性(xing)。PBS洗3遍。
五(wu)．封(feng)闭 或(huo)者(zhe)1-2%FBS封闭30min
六(liu)．除(chu)去封闭(bi)液，每张切片(pian)加1滴(di)或50μl的第一抗体，室温下孵育60分钟或4℃过夜(ye)，建议参见每种(zhong)抗体(ti)的说明书。
抗体稀(xi)释(shi)液：1%FBS溶液（可(ke)以加(jia)0.01%叠氮钠(na)）
七．洗一抗。PBS洗3遍，每次5min。
八(ba)．孵二抗2h(室温)FITC标(biao)记(ji) 山(shan)羊抗小(xiao)鼠(shu)二抗1:500，CY3标记的(de)山羊(yang)抗兔(tu)二抗1：500。
九．洗二抗 洗3遍，每次5min
十(shi)．擦干(gan)标本边(bian)缘(yuan)水分(fen)，加DAPI（1ug/ml）5min
十一. 把(ba)片子放(fang)PBS里(li)，取(qu)一张擦干水分，加mouting（sigma M1289）,盖上盖(gai)玻(bo)片，指(zhi)甲油封片。
