免疫(yi)组(zu)化实(shi)验(yan)步骤(zhou)：
1．包(bao)埋好(hao)的(de)标(biao)本(ben)用(yong)切片(pian)机(ji)切(qie)石(shi)蜡(la)切片3um
2．经(jing)60℃烘片1小(xiao)时
3．二(er)甲(jia)苯(ben)Ⅰ脱蜡10分钟(zhong)
4．二甲苯Ⅱ脱(tuo)蜡10分钟
5．梯度(du)酒精复水：100%酒(jiu)精(jing)5分(fen)钟，100%酒精5分钟，95%酒精5分钟，80%酒精5分钟，自来(lai)水冲洗(xi) 5分钟
6．进(jin)行(xing)抗(kang)原(yuan)修(xiu)复(fu)：将(jiang)切片置于(yu)0.1mol/L且(qie)ph=6.0的枸(gou)橼(yuan)酸液修复液中，沸水浴(yu)20分钟，停(ting)止(zhi)加热(re)后(hou)自(zi)然(ran)冷(leng)却20-30分钟
7. 用PBS 3分钟3次(ci)，组画笔(bi)画(hua)圈(quan)，滴加(jia)双(shuang)氧(yang)水，孵育20min
8． 用PBS 3分钟3次，滴加封(feng)闭血(xue)清(qing)封闭(bi)1h
9．甩(shuai)干 ，滴(di)加适宜(yi)浓(nong)度的一(yi)抗置湿(shi)盒中(zhong)4℃孵(fu)育过夜(ye)
10．用PBS 3分钟×5次洗去一抗
11．甩干(gan)，滴加二抗室(shi)温(wen)置孵育盒(he)中孵育(yu)1小时(shi)（注(zhu)意(yi)二抗种属(shu)，夏(xia)季30min，冬季1h）
12．用PBS 3分钟×5次洗去(qu)二抗
13．甩干，滴加DAB 显(xian)色，水(shui)冲(chong)
14．苏(su)木(mu)素染(ran)核(he)5min (新(xin)配(pei)置(zhi)的苏木素视情(qing)况(kuang)而(er)定(ding)
15.流水冲洗多(duo)余(yu)的苏木素(su)，分化液(ye)中分化(hua)1秒
16.流(liu)水冲洗5min
17.梯(ti)度酒精复水：80%酒精5分钟，95%酒精5分钟，100%酒精5分钟，100%酒精5分钟，二甲苯Ⅱ透明(ming)5min，二甲苯Ⅰ透(tou)明5min（如为(wei)完全透明，可适当延(yan)长(zhang)时间）
18.用中性树(shu)胶(jiao)封片
19.镜(jing)检(jian)
