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western blot检测
         蛋(dan)白印(yin)迹(ji)(Western blot, WB)是(shi)分子生(sheng)物学(xue)、生物化(hua)学和免疫(yi)遗(yi)传学中常(chang)用的一(yi)种试(shi)验方法,是将蛋白质通(tong)过(guo)SDS-PAGE电(dian)泳后,再(zai)转(zhuan)移(yi)到杂(za)交(jiao)膜上,然(ran)后通过抗(kang)原抗体复(fu)合物对特(te)定(ding)蛋白质进(jin)行(xing)特异性(xing)检(jian)测的方(fang)法。Western Blot法(fa)采(cai)用的是聚丙(bing)烯(xi)酰(xian)胺凝胶电泳(yong),被(bei)检测物是蛋白质,“探(tan)针(zhen)”是抗体,“显(xian)色(se)”用标记(ji)的二(er)抗。经(jing)过SDS-PAGE(聚(ju)丙烯酰胺(an)凝(ning)胶电泳)分(fen)离的蛋白质样品,转移到(dao)固(gu)相载(zai)体(例如硝(xiao)酸(suan)纤(xian)维(wei)素薄(bao)膜(mo))上,固相(xiang)载体以非(fei)共(gong)价(jia)键(jian)形(xing)式(shi)吸(xi)附(fu)蛋白质(zhi),且能(neng)保持(chi)电泳分离的多(duo)肽类(lei)型(xing)及(ji)其(qi)生物学活(huo)性不变(bian)。以固(gu)相载体上的蛋白质或多肽作(zuo)为(wei)抗原,与(yu)对(dui)应的抗体起(qi)免疫反(fan)应,再与酶(mei)或同(tong)位(wei)素(su)标(biao)记的第(di)二抗体起反应(ying),经(jing)过底物显(xian)色(se)或放射(she)自(zi)显影以检测电泳分离的特异性目的基因(yin)表达的蛋白成(cheng)分

样品准(zhun)备(bei)条件:

细胞样(yang)品(pin):收(shou)集(ji)细(xi)胞(bao)后(hou)放入液(ye)氮中(zhong)速冻(dong)保(bao)存或速(su)冻24 h后转入-80 °C冰箱保存。

组(zu)织样品:动(dong)物组织(zhi)一般(ban)取材(cai)后立(li)即(ji)放(fang)入液氮中速冻保存(cun),液氮冻存24 h后可(ke)转入-80 °C冰(bing)箱保存。

所(suo)有(you)样品的(de)处理(li)和(he)保存过程(cheng)中,切(qie)忌(ji)反复冻融(rong)。

样品运(yun)输条件(jian):样品运(yun)输条件(jian)根(gen)据(ju)实验样品的处理条件,可以(yi)选择(ze)液氮(dan)或者(zhe)干(gan)冰运输(shu)

您(nin)只(zhi)需(xu)提供(gong):

新(xin)鲜(xian)且(qie)足(zu)量(liang)的样品(组织不(bu)少于50 mg,细胞不少(shao)于(yu)106),或(huo)提取(qu)的总(zong)蛋白(bai)(≥ 50 μl),检测(ce)蛋白信(xin)息(xi),一抗(包(bao)括(kuo)抗体(ti)说(shuo)明(ming)书(shu))(若(ruo)无(wu)一抗,可有偿使(shi)用(yong)公(gong)司备存抗体或代购(gou))等(deng)。

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实验(yan)结(jie)果原(yuan)始(shi)胶(jiao)片(pian),电子(zi)版(ban)图片,目(mu)的条带(dai)光(guang)密(mi)度(du)值(zhi),完成实(shi)验报(bao)告(gao)单(dan)等

Western blot实验结果(guo)范(fan)例(li)图(tu)

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